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3415熒光蛋白激發(fā)光源區(qū)分平板上未編輯的和假定的編輯的菌落轉(zhuǎn)化子

更新時(shí)間:2022-09-20   點(diǎn)擊次數(shù):1241次

近日,中國(guó)科學(xué)院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所在《applied microbiology and biotechnology》期刊發(fā)表文獻(xiàn),文獻(xiàn)中指出利用LUYOR-3415熒光蛋白激發(fā)光源進(jìn)行篩選。下面是文獻(xiàn)摘要,文獻(xiàn)全文鏈接在網(wǎng)頁(yè)尾部

CRISPR/Cas9系統(tǒng)是一種強(qiáng)大的基因組編輯工具,目前已在一些絲狀真菌中成功應(yīng)用。但Cas9蛋白對(duì)真菌細(xì)胞存在的潛在毒性在一定程度上限制了該體系的進(jìn)一步推廣和應(yīng)用。AMA1是一種來(lái)源于構(gòu)巢曲霉的自我復(fù)制因子,它的衍生載體在沒(méi)有抗性選擇的情況下很容易丟失。本研究中,我們利用基于AMA1的Cas9表達(dá)載體在無(wú)抗篩選條件下的*丟失的特性,消除了Cas9對(duì)威尼斯鐮刀菌TB01的毒性。同時(shí),挖掘了兩個(gè)可用的用于CRISPR/Cas9系統(tǒng)sgRNA表達(dá)的內(nèi)源性Pol III啟動(dòng)子(FvU6374和Fv5SrRNA)。與FvU6374(40-50%)相比,F(xiàn)v5SrRNA具有更高的單基因編輯效率(> 85%),使用Fv5SrRNA同時(shí)編輯兩個(gè)基因的效率超過(guò)75%。利用上述建立的基因編輯系統(tǒng),我們刪除了一個(gè)編碼丁二醇脫氫酶的基因FvBDH,獲得的突變體菌株乙醇產(chǎn)量比野生型提高了52%。本研究開發(fā)的高效CRISPR/Cas9系統(tǒng)為后期通過(guò)代謝工程推進(jìn)威尼斯鐮刀菌TB01的發(fā)展奠定了技術(shù)基礎(chǔ);同時(shí),未來(lái)通過(guò)進(jìn)一步的遺傳改造和發(fā)酵工藝優(yōu)化后,獲得的FvBDH基因編輯轉(zhuǎn)化子有望用于菌絲蛋白和乙醇的同步生產(chǎn)。

 

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   通過(guò)熒光觀察,初步篩選了GFP基因編輯的變異體。使用手持熒光蛋白激發(fā)光源LUYOR-3415區(qū)分平板上未編輯的(熒光)和假定的編輯的(無(wú)熒光)菌落轉(zhuǎn)化子。轉(zhuǎn)化板被放置在一個(gè)黑暗的環(huán)境中。然后,打開激發(fā)波長(zhǎng)分別為450 nm和500 nm的綠色熒光樹脂激發(fā)光源,照亮平板觀察或拍攝菌落轉(zhuǎn)化子

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   LUYOR-3415RG便攜式熒光蛋白激發(fā)光源能夠觀察GFP、eGFP、dsred、Mcherry、Tdtomato等綠色熒光蛋白和紅色熒光蛋白的表達(dá),我公司針對(duì)科研院所免費(fèi)試用,試用滿意付款。我們?cè)诒本?、哈爾濱、武漢、鄭州、??谠O(shè)有代理商,如需演示,請(qǐng)和我們當(dāng)?shù)卮砩搪?lián)系。

上海路陽(yáng)儀器有限公司

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